○ 產(chǎn)品貨號(hào):APA128Ga01
TIMP2是一種分子量為22 kDa的非N-糖基化蛋白,可由多種細(xì)胞類型分泌,通過形成非共價(jià)二元復(fù)合物抑制MMPs活性。除抑制功能外,TIMP2還具有促紅細(xì)胞生成和細(xì)胞生長促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)通過熒光肽底物MCA-Pro-Leu-Gly-Leu-DPA-Ala-Arg-NH2(檢測緩沖液:50 mM Tris、10 mM CaCl2、150 mM NaCl、0.05% Brij-35,pH 7.5)評(píng)估重組雞源TIMP2(rgTIMP2,分子量23 kDa)對重組人源MMP2(rhMMP2)的抑制活性。具體步驟為:將100 μg/mL rhMMP2經(jīng)1 mM APMA于37℃活化1小時(shí)后,與系列濃度rgTIMP2(8 μL)及檢測緩沖液(59.2 μL)混合(對照組僅含緩沖液與rhMMP2),37℃孵育2小時(shí)。取50 μL五倍稀釋反應(yīng)液加入微孔板,加入50 μL 20 μM底物啟動(dòng)反應(yīng)(空白對照為50 μL緩沖液+50 μL底物),在320 nm激發(fā)波長/405 nm發(fā)射波長下進(jìn)行5分鐘動(dòng)力學(xué)檢測。如圖1所示,rgTIMP2可顯著抑制rhMMP2活性,其半數(shù)抑制濃度(IC50)小于16 nM。○ 結(jié)果展示
