巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)與巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R)的結合活性檢測
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF),也稱為CSF-1,是一種分泌型細胞因子,它可以影響造血干細胞分化為巨噬細胞或其他相關細胞。 M-CSF是造血生長因子,參與單核細胞,巨噬細胞和骨髓祖細胞的增殖,分化和存活。它還通過吞噬和趨化活性影響巨噬細胞和單核細胞,并增加了腫瘤細胞的細胞毒性。M-CSF的作用不僅限于單核細胞/巨噬細胞,通過與膜受體相互作用(C-fms編碼的CSF1R或M-CSF-R原癌基因),M-CSF還可以調節(jié)早期造血細胞的增殖,并影響多種免疫、新陳代謝、生育能力和懷孕相關的生理過程。此外,巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R)被確定與M-CSF能交互反應,因此可通過結合酶聯(lián)免疫吸附測定以檢測重組人M-CSF和重組人MCSFR的結合力。
簡而言之,將M-CSF在含有0.01%BSA(pH 7.4)的PBS中連續(xù)稀釋,然后將不同濃度的M-CSF加入包被有M-CSF-R的微孔中,并在37℃孵育2小時。用PBST洗滌孔,并與抗M-CSF的抗體孵育1h,棄去液體并洗凈3次。與HRP標記的二抗體孵育后,棄去液體并洗凈3次。加入底物液50uL,將微孔板在37℃下孵育15-25分鐘。最后,加入50μL中止液并立即在450nm讀取。M-CSF和M-CSF-R的結合活性如下圖所示:
以上使用的活動蛋白信息為:
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF):APA090Hu01
巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R):RPB484Hu01