氨基端前腦鈉素（N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide，簡稱 NT-proBNP）， 心肌細胞合成的腦鈉肽原分泌到血液中后，會在內(nèi)切酶的作用下分解產(chǎn)生 BNP （BNP 的具體介紹，請關(guān)注專題腦鈉肽 BNP-心力衰竭的重要標記物）和 NT-BNP， 見圖1。由于 NT-BNP 不具備生物活性，在體內(nèi)半衰期長，易于長時間跟蹤，所以 可作為臨床對心血管類疾病監(jiān)測的標志物，國內(nèi)外心血管研究人員對其頗感興趣。 2004年和2008年國際專家系統(tǒng)闡述了 BNP 和 NT-proBNP 的生物學(xué)和臨床應(yīng)用特 點。近年來，NT-BNP 的檢測也逐漸被我國各級醫(yī)院和醫(yī)師廣泛用于臨床，作為心 力衰竭診斷和評估的生物學(xué)標記物，我國在2007年《慢性心力衰歇診斷治療指南》 和2010年《急性心力衰竭診斷和治療指南》也推薦將 NT-proBNP 用于心衰的診斷 和愈后判斷。

基于 NT-BNP 在心力衰竭監(jiān)控中的重要作用，Cloud-Clone Corp.公司一直對其 非常關(guān)注，關(guān)于 NT-proBNP 的系列產(chǎn)品也應(yīng)運而生，具體產(chǎn)品研制介紹如下。

首先，Cloud. Clone Corp. 利用高通量的表達系統(tǒng)表達重組 NT-proBNP。 對應(yīng) NCBI 中 NM_002521 的 CDS（編碼腦鈉肽原的核酸序列）確定編碼 NT-proBNP 的 mRNA 序列， 并于 C 端引入終止子密碼子（TAA），以此作為模板來設(shè)計引物。

[PRIMER INFORMATION]

Upstream Primer: CGGAATTCCACCCGCTGGGCAGCC

Downsream Primer: CCGCTCGAGTTATCGTGGTGCCCGCAGG

完成引物設(shè)計后，利用 PCR 技術(shù)獲得片段為 231bp 的 DNA 片段。測序正確后， 采用傳統(tǒng)的雙酶切與 Cloud-Clone Corp.自主構(gòu)建的大腸桿菌表達載體 pUSCNK-2 進行連接，并用于后期的蛋白表達，測序結(jié)果如圖 2 所示。

1 CACCCGCTGGGCAGCCCCGGTTCAGCCTCGGACTTGGAAACGTCCGGGTTACAGGAGCAG

61 CGCAACCATTTGCAGGGCAAACTGTCGGAGCTGCAGGTGGAGCAGACATCCCTGGAGCCC

121 CTCCAGGAGAGCCCCCGTCCCACAGGTGTCTGGAAGTCCCGGGAGGTAGCCACCGAGGGC

181 ATCCGTGGGCACCGCAAAATGG TCCTCTACACCCTGCGGGCACCACGATAA

圖 2 pUSCNK-2 人 NT-proBNP 測序結(jié)果

體外 IPTG 誘導(dǎo)表達，獲得一個大小約 12.3KD 的重組蛋白（融合 his-tag 和 T7-tag），采用鎳柱純化，獲得純化后的重組蛋白 NT-proBNP（貨號 RPA485Hu01）， 蛋白序列信息如圖 3 所示。

MGSSHHHHHH SSGLVPRGSH MASMTGGQQM GRGSEF-HPLG SPGSASDLET SGLQEQRNHL QGKLSELQVE QTSLEPLQES PRPTGVWKSR EVATEGIRGH RKMVLYTLRA PR 圖 3 人 NT-proBNP 重組蛋白序列信息

通過 SDS-PAGE 驗證純化得到的重組蛋白，純度大于95%，SDS-PAGE 結(jié)果 如圖4。將純化的重組蛋白免疫小鼠，并通過單克隆抗體制備方法獲得抗人 NT-proBNP 的單克隆抗體，然后采用親和層析法獲得高特異性的純化抗體。同時 該蛋白免疫家兔后，經(jīng)過純化制備了兔抗人 NT-proBNP 的多克隆抗體（貨號 PAA485Hu01）。

對于純化的抗體，用 Western Blot 對其純度和特異性進行了檢驗，結(jié)果如圖5 所示。

將獲得的高純度的蛋白以及高特異性的抗體作為原料，Cloud-Clone Corp.自主 研制出相應(yīng)的人氨基端前腦鈉素 ELISA 定量檢測試劑盒（貨號 SEA485Hu）及 CLIA 定量檢測試劑盒（貨號 SCA485Hu）。方便廣大科研工作者準確定量生物樣本中的 NT-proBNP 含量，提供研究依據(jù)。產(chǎn)品詳細信息如圖 6，科研工作者們可以根據(jù)需 要，對產(chǎn)品進行選購。

更多相關(guān)產(chǎn)品，請查詢 www.cloud-clone.us。